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环氧活化-琼脂糖凝胶6B的偶联步骤级注意事项

作者:北京索莱宝科技有限公司 2016-06-18T00:00 (访问量:3232)

产品简介

环氧活化-琼脂糖凝胶6B以6%琼脂糖凝胶为基质,采用环氧活化的方法激活琼脂糖上的羟基,活化后即可直接用于各种配基的偶联。可用于各种含有氨基、巯基 或羟基的亲和配基(蛋白质、多肽、氨基酸或糖等)的偶联。具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。

产品相关参数:

产品名称:环氧活化-琼脂糖凝胶6B

货号:E8260

规格:5g

GRADE:BR

英文名称:Epoxy-activated Sepharose 6B?

其他名称:Epoxy活化琼脂糖凝胶6B

基质:6%高度交联琼脂糖凝胶

功能基团:epoxy

配基密度:20-40μmoles/mL drained matrix

平均粒径:90μm

最大流速:300cm/h

偶联条件:pH8-10,温度 4-45°C,时间1-16小时,可在水相和有机相中偶联

用途:亲和层析介质

性状:白色胶体;

储存温度:4-8°C

偶联步骤

该环氧活化琼脂糖凝胶介质可以和含有氨基、巯基或羟基的亲和配基的蛋白质、多肽、糖等物质偶联。具体的偶联方法如下(偶联BSA为例):

洗涤:用10-20倍胶体积的去离子水冲洗保存存储液中的环氧活化胶,除去存储液,抽干;

偶联:称取200mg BSA,溶于10ml 0.1M pH 9.0碳酸钠缓冲液,加入到洗涤抽干的活化胶中,在37℃摇床上振荡12-24h偶联,偶联完毕后将料液转移到砂芯漏斗中抽干;

封闭:将抽干的偶联BSA的胶加入到100 ml三角瓶中,加入30 ml 1 mol/L乙醇胺溶液。搅拌速度120 rpm,37 ℃条件下反应4h,然后将料液转移到砂芯漏斗中抽干。

清洗:然后依次用5倍的去离子水、0.1 M含0.5M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH 4.0)、去离子水、0.1M含0.5M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液(pH 8.0)和去离子水充分洗涤后,抽干。

保存:保存于4℃、20%乙醇溶液中。

注意事项:

1.不同配基的偶联方法与上面类似,但是反应的条件例如:配基加入量,反应时间,反应温度应根据配基的不同进行适当的调整; 

2.可用碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液做为偶联缓冲液,但绝对不能使用含有氨基的Tris、甘氨酸的缓冲液。

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