在实验室小心翼翼的你,怎奈何体外细胞的脆弱不堪,百密终有一疏。
你偶然的一个喷嚏,不经意地撩了下秀发,小动作一时爽,细胞白培养!
预防和避免污染是细胞培养成功的关键因素,一旦污染不仅浪费时间,而且浪费人力、物力,甚至造成无法弥补的损失。值得庆幸的是并非所有的细胞污染都是致命的,及时发现,采取正确的方式力挽狂澜方为正道!
细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物,还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质。常见的污染主要包括:细菌、真菌、支原体、黑胶虫、病毒、原虫以及非细菌污染共七种类型,每一种污染都有各自的特点,如细菌和真菌增殖迅速,短时间内会对细菌造成明显伤害,而支原体和病毒对细胞的影响则是一种缓慢长期的过程。
叮咚!你有一份细胞鉴污指南等待查看!
耐思手把手教你鉴别细胞污染!
1、细菌、真菌污染检测
(1)肉眼观察
细菌、真菌污染一般是由传代、换液、加样等开放性操作因此,而且增生十分迅速。
若有污染,在48小时内可观察到明显特征,例如培养液变混浊,略加振荡后培养液中有很多漂浮物。
(2)接种观察
采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种,接种后可明显观察到是否有污染。
(3)镜下观察
在倒置显微镜的高倍镜下若见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮,即可判定为细菌污染。
若观察到细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质即可判定为真菌污染。
2、支原体污染检测
(1)相差显微镜观察
直接取少许培养液滴在载物片上,利用显微镜观察。
支原体在镜下呈暗色微小颗粒,多位于细胞与细胞之间,有时可见类似于布朗运动的表现。
(2)荧光染色法观察
用荧光染料Hoechst33258,此染料能与DNA特异性结合,可使支原体内的DNA染色并在荧光显微镜下呈绿色小点,散在于细胞周围或附于细胞表面。
(3)电镜检测
若条件许可,可在细胞培养48~72小时,用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后可用扫描电镜或透射电镜观察。
(4)培养检测
将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基,培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀,然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中,再用琼脂培养基做分离培养,37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。
3、病毒污染检测
(1)应用电镜技术快速诊断动物病毒病
(2)逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒
耐思早已从根源为你预防细胞污染!
耐思新增液体输送系统,为制药、生物技术和实验室等提供无菌输送解决方案,实现液体的封闭式导入。
目前 细胞工厂、摇瓶、方形试剂瓶、离心管等密闭系统 已正式上线,转移盖一体注塑成型,通用型强,永绝细胞污污污后患,为你的细胞带来全方位的呵护。