T4 DNA连接酶

产品及特点

T4 DNA连接酶从表达T4 gene 30的E.coli 细胞中分离纯化而得，由一个分子量为68 KDa的单亚基组成。

1. 催化连接反应，即dsDNA，dsRNA和DNA/RNA分子的粘性末端和平末端5-P末端和3 -OH末端之间形成磷酸二酯键。

2. 修复dsDNA反应中的切口（Nick）

3. 催化pyrophosphate 和ATP之间的磷酸交换反应（Weiss酶单位定义原理）

4. 需要ATP、Mg2+ 和DTT，最佳pH为pH 7.5 - 8.0。

5. NaCl 浓度在200 mM以上时有抑制作用。

6. 1 %-10% PEG和 150-200 mM NaCl能促进连接反应（尤其是平末端DNA）

效率。

质检标准

无endodeoxyribonucleases，exodeoxyribonucleases，phosphatasesand ribonucleases污染。SDS-PAGE下呈单一带，纯度>99%。

活性单位定义（此处是Weiss单位）

以Oligo(A)n为底物，在5℃、10分钟内使1 pmol 的[5 -32P ]pCp掺入酸不溶性深沉物所需要的酶量定义为1个活性单位(U)(RNA3末端标记反应)。66 mM Tris-HCl(pH 7.6)，6.6 mM MgCl2，0.066 mM ATP，10 mM DTT，3.3 μM [32PPi].66 mM Tris-HCl(pH 7.6)，6.6 mM MgCl2，0.066 mM ATP，10 mM DTT，3.3 μM [32PPi]。

Buffer成分

储存Buffer：20 mM Tris-HCl(pH 7.5)，1 mM DTT，50 mM KCl，0.1mM EDTA和50%（v/v）glycerol。反应Buffer，10×：400 mM Tris-HCl，100 mM MgCl2，100 mM DTT，5 mM ATP（pH 7.8 at 25℃）。