iTRAQ技术原理：

    同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术是近年来最新开发的一种新的蛋白质组学定量研究技术，具有较好的定量效果、较高的重复性，并可对多达四种不同样本同时进行定量分析。

    iTRAQ试剂为可与氨基酸N端及赖氨酸侧链连接的胺标记同重元素(isobaric)。在质谱图中，任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。
        在串联质谱中，信号离子表现为不同质荷比(114～117)的峰，因此，根据波峰的高度及面积，可以得到蛋白质的定量信息。
►  可同时对4个样品进行蛋白差异分析，节省样品的用量和检测的时间；
►  二级碎片离子信号增强，产生质量更高的二级质谱，确保鉴定结果高的可信度；
►  可进行多个时间点、细胞周期、细胞信号传导整个过程蛋白质组动态变化的监测；
►  可分析详细分期型的临床疾病标本，并可设计样本重复，甚至可以进行个体样本的研究。

iTRAQ试剂结构：
  iTRAQ试剂是一种小分子同重元素化学物质，包括三部分：
  一端是报告部分 reporter group
  另一端是肽反应部分 peptide reactive group
  中间部分是平衡部分 balance group
其中： reporter group：质量为114Da、115 Da、116 Da、117 Da，因此iTRAQ试剂共四种。
• peptide reactive group：将reporter group与肽N端及赖氨酸侧链连接，几乎可以标记样本中所有蛋白质。
• balance group：质量为31 Da、30 Da、29 Da、28 Da，使得四种iTRAQ试剂分子量均为145 Da，保证iTRAQ标记的同一肽段m/z相同。
 

图1 iTRAQ 试剂结构

图2 iTRAQ 试剂标记原理

综上：
  4个来源不同的相同蛋白样品在一级质谱上表现相同
  Balance group在二级质谱发生中性丢失
  Reporter group 在二级质谱产生４个报告离子，分别是114、115、116和117
  通过分析报告离子的峰强度比值就可以分析同一个蛋白在不同样品间的表达量比值
操作流程：
 

适用范围:

     研究不同生理和病理条件下细胞内蛋白质的含量和状态变化是比较蛋白质组学的核心内容.要揭示上述动态过程往往需要进行多个样品的同步比较分析.近年来，在体内和体外同位素标记基础上，用多维液相色谱分离多肽，进而用串联质谱进行相对定量的分析方法已成为高通量比较蛋白质组研究的主要手段之一. iTRAQ标记-串联质谱分析技术是目前唯一一种可以进行四重蛋白质样品同步比较的相对定量技术。

适合样本：血浆、体液、组织、植物、细胞培养物、细菌及真菌。

如何分组：

分期型的临床疾病/肿瘤分期标本、不同药物/方法处理的细胞、不同发育阶段生物个体、生物体的不同器官/组织