selleck产品在文献中的引用; 
    
   
PLoS One, 2011,   6(9):e25683
  
  
   
J Biol Chem, 2012, 287(52):43639-50
  
  
   
Nat Biotechnol, 2013, 32(1):92-6
  

客户使用selleck产品的实验数据:
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生物活性
产品描述
AT7519是多种CDK抑制剂，作用于CDK1， 2， 4， 6和9时，IC50为10-210 nM，对CDK3作用效果稍弱，对CDK7几乎没有抑制活性。Phase 1。
靶点
CDK1/cyclin B
CDK2/Cyclin A
CDK3/Cyclin E
CDk4/Cyclin D1
CDk5/p35
CDK6/Cyclin D3
IC50
210 nM
47 nM
360 nM
100 nM
13 nM
170 nM [1]
体外研究
AT7519是ATP竞争性CDK 抑制剂，作用于CDK1 时Ki值为38 nM。 AT7519作用于所有非CDK激酶（除了GSK3β，IC50=89 nM）没有抑制活性。AT7519作用于多种人类肿瘤细胞系，显示有效的抗增殖活性，IC50值从作用于MCF-7的40 nM到作用于 SW620 的940 nM ，与抑制CDK1和 CDK2一致。[1] AT7519作用于多发性骨髓瘤(MM)细胞系48小时，诱导剂量依赖性毒性IC50值从 0.5到2 μM，最敏感细胞系为MM.1S (0.5 μM)和U266 (0.5 μM) ，最抵抗细胞为MM.1R (>2 μM), 但是作用于外周血单个核细胞(PBMNC)不会诱导毒性。AT7519部分克服由 IL6 和IGF-1引起的增殖优势，且保护骨髓基质细胞 (BMSCs)。AT7519 诱导RNA pol II CTD 在serine 2 和serine 5 位点快速去磷酸化, 且作用于MM 细胞通过产生毒性而抑制部分转录 。AT7519通过下调GSK-3β磷酸化而诱导 GSK-3β激活，也因为 AT7519诱导凋亡，但是不抑制转录。[2]
体内研究
AT7519 按9.1 mg/kg剂量作用于 HCT116 和HT29 结肠癌移植瘤模型，每天两次，引起早期和晚期肿瘤衰退。[1]AT7519按 15 mg/kg 剂量作用于携带人类MM移植瘤的小鼠模型，抑制肿瘤生长，这和提高的caspase 3激活相关。[2]
特征
 
推荐的实验操作(此推荐来自于公开的文献所以Selleck并不保证其有效性)
激酶实验: [1]
体外激酶实验
辐射滤波器结合格板上进行CDK1,CDK2和GSK3-β激酶实验。在DELFIA格式板上测定CDK5，在ELISA格式板上测定CDKs 4和 6。为了测定CDKs 1和2,相关的CDK 和0.12 μg/mL组蛋白H1在20 mM MOPS, pH 7.2, 25 mM β-甘油磷酸盐, 5 mM EDTA, 15 mM MgCl2, 1 mM原钒酸钠, 1 mM DTT, 0.1 mg/mL BSA, 45 μM ATP (0.78 Ci/mmol)和不同浓度AT7519的混合物中分别温育2或4小时。测定 GSK3-β,相关的酶和 5 μM糖原合酶肽2在10 mM MOPS pH 7.0, 0.1 mg/mL BSA, 0.001% Brij-35, 0.5% 甘油, 0.2 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0.01% β-巯基乙醇, 15 μM ATP (2.31 Ci/mmol) 和不同浓度AT7519 的混合物温育3小时。加入过量正磷酸终止反应，使用Millipore MAPH滤板过滤。然后冲洗板，加入闪烁剂，在 Packard TopCount上通过测定闪烁数而测量放射性。为了测定CDK5, CDK5/p35 和 1μM 生物素化的组蛋白H1肽段(生物素-PKTPKKAKKL) 在25 mM Tris-HCl, pH 7.5, 2.5 mM MgCl2, 0.025% Brij-35, 0.1 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 15 μM ATP 和不同浓度AT7519的混合物温育30分钟。使用EDTA终止反应,转移到 Neutravidin包被的板上，通过兔磷酸-cdk1 底物单抗和DELFIA Eu-标记的二抗抗兔 IgG，使用时间分辨荧光测定λex=335nm,λem=620nm处荧光值，而量化磷酸化底物。为了测定CDK 4和6,用 GST- pRb769-921包被板，然后用Superblock阻断。CDK4或6在15 mM MgCl2, 50 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 1 mM EGTA, pH 8.0, 0.02% Triton X-100, 2.5% DMSO 和不同浓度AT7519混合物中温育，加入 ATP开始反应。30分钟后，加入 0.5 M EDTA pH 8.0终止反应。冲洗板，和一抗温育1小时，然后在 Superblock上稀释，随后用碱性磷酸酶链接抗兔二抗再处理1小时。使用Attophos系统进行板显影，然后在Spectramax Gemini计数板上读取荧光值。使用GraphPad Prism 软件从复制曲线中计算IC50 值。
细胞试验: [2]
细胞系
MM.1S, MM.1R, RPMI8226, U266, RPMI8266, RPMI-Dox40, OPM1 细胞,原代 MM细胞和 PBMNCs
浓度
溶于DMSO，浓度为 10 mM, 终浓度为 0.25-4 μM
处理时间
24或48小时
方法
37oC下不同浓度AT7519处理细胞24或48小时。通过测量MTT染料吸光度而测定细胞活性。通过测定摄入的3H胸腺嘧啶(3H-TdR)而测定DNA合成。使用Annexin V/PI染色测评凋亡。细胞是凋亡百分数是早期凋亡数(Annexin V-阳性细胞 )和晚期凋亡数 (Annexin V-阳性和PI-阳性细胞)总和。
动物实验: [2]
动物模型
皮下注射MM.1S细胞的雄性SCID小鼠
配制
溶于0.9%盐水
剂量
15 mg/kg/day
给药处理
腹腔注射
溶解度
30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W, 30 mg/mL
参考文献
[1] Squires MS, et al. Mol Cancer Ther, 2009, 8(2), 324-332.
[2] Santo L, et al. Oncogene, 2010, 29(16), 2325-2336.