HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit
无缝衔接 dUTP/UDG 防污染系统与一步探针法 qRT-PCR试剂盒
支持多重探针检测
UDG防污染系统： Heat-labile UDG 室温下迅速降解含U 的双链DNA 污染物，Heat-labile UDG 在50-55℃迅速彻底失活，维持cDNA 的完整性
超高的检测灵敏度：可检测到个位数拷贝的模板或 0.1 pg 总 RNA
图1. HiScript® II U + One Step qRT-PCR Probe Kit 工作原理
图2. 以 HeLa 细胞总 RNA 为模板，用 HiScript® II U + One Step qRT-PCR Probe Kit 扩增 RFLPO 基因
由图可见，优化的 dUTP 浓度以及 Heat-labile UDG 使得扩增效率和灵敏度不会受到影响。相比之下，E.coli 来源的 UDG 会严重影响 One Step RT-qPCR的检测灵敏度。
dUTP/UDG 防污染系统是一种非常有效的控制 PCR 扩增产物污染的手段。在以 DNA 为模板的 PCR 检测试剂中，已逐渐成为了一种强制标准。不过，常用的 E. coli UDG 在通常的逆转录温度 (42-55℃ ) 下仍具有较高的活性，会降解 cDNA，导致 One Step RT-PCR/qPCR 的灵敏度降低。
HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit 含有比例优化的dUTP/dNTP mix，并加入了来源于嗜冷海洋细菌的Heat-labile UDG。Heat-labile UDG在室温下具有很高的活性，在反应体系混合过程中即可充分降解含U的双链DNA。当反应体系升温至50-55℃ (HiScript® II 的最适反应温度)时，Heat-labile UDG 迅速彻底失活，维持cDNA 的完整性，保证检测灵敏度不受影响。
组分 | Q223-01 250 rxn (20 μl/rxn) |
RNase free ddH2O | 1.25 ml × 2 |
2 × One Step U+ Mix a | 1.25 ml × 2 |
One Step U+ Enzyme Mix b | 250 μl |
50 × ROX Reference Dye 1 c | 100 μl |
50 × ROX Reference Dye 2 c | 100 μl |
a. 包含dNTP/dUTP Mix，Mg 2+。
b. 包含HiScript® Ⅱ Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Heat-labile以及Champagne Taq DNA Polymerase。
c. 用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。
- 20℃避光保存
