产品货号：ARL0010K

产品介绍：

辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase, HRP）是免疫学实验和检测重要工具酶，应用广泛。

但是传统的碘标记法和戊二醛标记法步骤繁琐，需要准备大量的试剂，如果试剂比例使用不合理可能往往导致实验的失败，本产品在反复分析HRP结构特点的基础上，将HRP采用高效活性偶联试剂活化，可以更高效共价结合蛋白质或抗体是上的-NH2；本产品中活化HRP为干粉状态，性质稳定，便于运输和长期储存。

适用范围：

本试剂盒适用于带有-NH2氨基的物质的HRP标记，比如：带有伯胺的小分子化合物，蛋白或者抗体。

基本原理：

本试剂盒中的活化HRP在标记缓冲液催动下可以与蛋白质或抗体上-NH2发生高效共价反应。

主要组分：

储存条件：

该试剂盒在低温下运输，收到后请置于2-8℃保存，保存时间2年以上。

标记前准备：

待标记物的准备：

1.待标记物以0.01M pH7.4 PBS环境为佳，不应含有甘油、BSA、叠氮钠、氨基物质（包括甘氨酸、Tris 等），EDTA等物质。如果含有以上小分子物质，需用0.01M pH7.4 PBS 缓冲溶液进行充分透析、脱盐柱脱盐或者超滤管超滤置换溶液以除去干扰小分子，如果含有保护性蛋白BSA等需要想办法将其分离去除；

2.调整待标记物至适当的浓度，抗体调整的浓度为2-10mg/mL为宜；对于小分子物质需要实验者摸索浓度，保证HRP的比例过量，如果不能确保HRP过量的话，标记完之后最好透析或者过滤除去未标记的小分子物质；

3.最佳标记反应条件为试剂盒所提供的标记缓冲液环境，尽可能在标记前将待标记物溶液环境置换为标记还缓冲液；

4.如果待标记物溶液中有不溶物、有块状物或者沉淀请离心或者过滤除掉。

标记操作流程：

1.待标记物的准备参照上述建议准备

2.标记前准备：从4℃取出HRP标记试剂盒，平衡至室温。

3.标记反应：

1）向待标物的溶液中加入1/10体积的标记缓冲液，用移液枪反复吹打几次以充分混匀，避免产生气泡（如果待标记物已经按照上述“标记前准备”第3条建议置换成标记缓冲液缓冲液环境，可以直接使用）；

2）取活化HRP干粉，加入去离子水溶解到10mg/ml浓度（例如：0.5mg活化HRP冻干粉加水50ul溶解），按照合适比例将活化HRP与待标记抗体混匀（如果标记抗体，按照等质量活化HRP加入到待标记物；例如：0.5mg待标记抗体加入0.5mg活化HRP），用移液枪反复吹打几次以充分混匀，避免产生气泡，室温反应1小时以上。

Frdbio®注意：活化HRP干粉一旦复溶后请立即使用，不可以保存下次使用。

4.标记反应终止（此步骤选做）：

将反应终止液干粉管中加入1mL去离子水配成反应终止液[2.5mg/ml]，取适量的反应终止液加入上述步骤3的反应液中，比例为：每10μL反应液加入1μL反应终止液。充分混匀，室温放置1 小时。

5.标记物产物收集与保存：

终止完成后，加入等体积的标记物保存液，充分混匀，置于-20℃保存。

如果标记完以后将标记产物加入适量标记物保存液，上述步骤“标记反应终止”不需要进行

附表：抗体标记用量参考表（本表仅做参考）

声明：本表只做参考，具体还是需要实验人员根据实际情况摸索条件。

Frdbio®注意：活化HRP干粉一旦复溶后请立即使用，不可以保存下次使用。

*本试剂仅供实验室研究使用*