Taq DNA 连接酶

产品及特点

Taq DNA 连接酶能够催化磷酸二酯键的形成，使杂交到同一互补靶 DNA 链上的两条契合寡核苷酸链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端通过磷酸二酯键连接。这个连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。在 45℃-65℃ 范围内，TaqDNA 连接酶均有活性。它具体有下列特点：

1. 耐热性好

2. 可在 PCR 和连接酶链式反应过程中掺入磷酸化寡核苷酸

3. 可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测

4. 可通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变活性单位定义（粘性末端活性单位）

1 单位是指在 50 μL 反应体系中，45 ℃ 反应条件下，15 分钟能使 50% 的 12bp 粘性末端片段发生连接所需要的酶量。12bp 粘性末端来自于 BstEII 消化 1μgλDNA。

反应条件

1X Taq DNA 连接酶反应缓冲液 [20 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25 ℃），25mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100]，45 ℃ 温育。本酶需 NAD+ 作辅因子，NAD+ 已被添加在 10X Taq DNA 连接酶缓冲液中；为了延长 NAD+ 的半衰期，缓冲液应于 -70℃ 贮存。

Buffer 成分

50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.4),0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 200μg/ml BSA and 50% glycerol。

参考文献

(1) Barany, F. （1991）Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 189–193.

(2) Takahashi, M. et al. （1984） J. Biol. Chem., 259, 10041– 10047.

(3) Barany, F. （1991）. The Ligase Chain Reaction in a PCR World, （pp.5–16）. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

(4) Michael, S.F. （1994） Biotechniques, 16, 411–412.