产品内容： 

缓冲液（Reagent A） 10ml

染色液A（Reagent B1） 1管

染色液B（Reagent B2） 1ml

氧化液（Reagent C） 500μL

标准液（Reagent D） 50μL

产品说明： 

总抗氧化能力（TAC）终点比色法定量检测试剂是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料 ABTS 氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水 溶性生育酚 Trolox 的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。通过过硫酸钾 氧化 2,2’-连氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）产生的 ABTS 自由基，衡量体系中抗氧化剂捕获自由 基、消耗抗氧化剂的能力，在分光光度仪（730nm 波长）的帮助下，观察其峰值下降的变化，并与 标准化抗氧化剂水溶性生育酚 Trolox 对照。适用于各种细胞、组织、血液、体液等样品的总抗氧化 能力检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

用户自备： 

1. 1.5 毫升离心管：用于标准样品配制的容器

2. 96孔板：用于比色的容器

3. 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤： 

一、标准液准备 

1． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

2． 分别加入20μL缓冲液（Reagent A）到2至5号管

3． 移取40μL标准液（Reagent D）到1号管，混匀

4． 小心移取20μL 1号管的标准液（Reagent D）到2号管，混匀

5． 小心移取20μL 2号管稀释的标准液（Reagent D）到3号管，混匀

6． 小心移取20μL 3号管稀释的标准液（Reagent D）到4号管，混匀

7． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

二、样品测读

实验开始前，将－20冰箱里的试剂置于室温下融化，移取1ml染色液B（Reagent B2）到1管染色 液A（Reagent B1）里，混匀，置于暗室里室温下孵育过夜（16小时）后，标记为染色工作液，避免 光照。

然后进行下列操作。 

1． 准备1个96孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔。

2． 分别移取100μL缓冲液（Reagent A）到96孔板里的每个孔里

3． 分别加入10μL染色工作液

4． 分别加入10μL氧化液（Reagent C）

5． 加入5μL缓冲液（Reagent A）到空白对照孔

6． 加入5μL上述配制的标准液（Reagent D）到相应标准对照孔里

7． 加入5μL待测样品（100微克蛋白总量）到样品孔里

8． 轻轻摇动96孔板，使其混匀

9． 室温下孵育1分钟

10． 即刻放进酶标仪里测读：730nm波长

11． 分析结果：

1） 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位（OD730nm）；横座标（X轴）为标准Trolox浓度（μmol/L）

2） 空白对照孔为最大吸光单位（OD730nm）读数

3） 标准对照孔和样品孔为实际吸光单位（OD730nm）读数

4） 根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（μmol/L）

5） 计算样品实际总抗氧化能力 {根据标准曲线获得样品对应Trolox浓度（μmol/L）×0.25（体系容量；ml）×样品稀释倍}÷0.01 （样品容量；ml）=（μmol/L Trolox浓度）

6） 根据下列公式计算测定体系中样品量的总抗氧化能力（实际抑制百分率） 【（空白对照孔吸光单位读数 - 实际吸光单位读数）÷空白对照孔吸光单位读数】×100% 7） IC50：50％抑制率所需的样品单位：TROLOX等值或样品蛋白浓度（mg/ml）或样品容量（μL） X（所需样品单位）=（已知样品单位÷实际抑制百分率）×50%

注意事项： 

1． 本产品为50次操作

2． 本产品测试范围为低浓度0至25μmol

3． 操作时，须戴手套

4． 样品制备的所有操作均须在4℃状态下进行

5． 测试前，样品须新鲜收集

6． 样品须清澈

7． 样品避免含有Tris、EDTA和还原剂等

8． 空白对照孔的吸光读数应为0.8，如果低于0.5，须增加染色工作液的室温孵育时间；如果高于1.0， 建议使用无离子水稀释到规定范围

9． 本产品可以检测纳摩尔级抗氧化剂

10．样本量不宜超过10微升

11．可以使用比色皿检测

12．如果样品抗氧化剂浓度过高或过低，建议稀释或增加样品浓度

13．如果测试样品很多，建议使用排枪移液