动物品种

SD大鼠

动物性别

雌雄均可

动物周龄

6-8周

造模方法

1.  造模手术前2 h腹腔注射青霉素钠2×105 U以抗炎。

2.  麻醉、消毒、固定。

3.  大鼠胸椎T10节段定位：触及大鼠背部，找到胸椎最高点，往上数3个棘突对应的椎体位置即为胸椎T10节段。

4.  在T9~11节段对应背部行正中直切口，止血钳钝性分离开口皮肤与肌肉层之间的黏膜。

5.  辅助固定钩拉开两侧皮肤，充分暴露手术区肌肉视野，眼科剪于中线（棘突边缘）两侧肌肉行直切口。如果有少量出血，使用棉签清洁手术区，眼科剪剪掉T9~11节段区域棘突及其他少量多余肌肉组织，充分暴露T9~11节段椎板。

6.  去除两侧关节突，直接暴露直径约为0.5cm圆形区域的脊髓背侧，注意暴露范围必须大于选用的玻璃管直径，不留骨突，以防止重物自由落下时被周围组织遮挡。  

7.  在暴露的硬膜表面放置一弯曲度与脊髓表面一致的0.5cm×0.3cm大小的弧形塑料垫片（纱布）

8.  将一根内径刚好能够容纳并允许金属棒自由滑动的玻璃导管竖直固定在滴定台蝴蝶夹上，再调整使玻璃导管对正已放置在脊髓背侧的垫片，在垂直方向上调整玻璃管高度。

9.  别克针（直径2.5mm、长11.2cm、重10 g的圆柱状金属棒）沿玻璃导管在垫片正上方2.5cm高度处做自由落体运动，撞击在大鼠脊髓背侧的垫片上，致伤能量25 gcf。

10.  将垫片和克氏针迅速移开后观察大鼠的心跳和呼吸无异常。

11.  依次缝合肌肉、筋膜和皮肤，并用碘伏消毒切口及周围。在伤口周边撒上青霉素粉剂以抗感染。

成模鉴定

1.  撞击后见大鼠躯体颤抖，鼠尾痉挛性摆动，双下肢迅速回缩扑动后瘫痪，肉眼下见脊髓硬膜下血肿形成，假手术组大鼠只行棘突和椎板切除术，而不对其行SCI造模

2.  BBB运动功能评分法：观察期为4min，在125cm×125cm空间内进行，采用三人盲法进行评分，评分前对其进行培训使其详细掌握评分细则及标准，三人在同一时间独立观察大鼠双后肢的运动功能并记录进行评分，最后取三个评分中最低值作为功能评分。 

3.  Rivlin斜板试验：采用改良Rivlin方法，用一预先粘贴好3mm厚橡胶垫的长方形木板作为斜板，斜板可通过与底板连接的铰链进行旋转来调节斜板倾斜的角度。将大鼠置于斜板之上， 使其头部向前，身体长轴线垂直于斜板的纵轴。检测从水平位置(0°)开始，每次使斜板旋转升高5°，逐渐加大斜板与水平面问的角度，记录大鼠能够停留5秒的最大角度为其功能角度值。正常大鼠维持身体停留5秒时，斜板的倾斜角度大约为73° 

4.  HE染色

造模周期

3d

后续检测指标建议

仔细游离并完整取出伤段及头尾段共1.0cm的脊髓组织，放入预盛有4％多聚甲醛的离心管中固定24小时，HE染色后光镜观察脊髓损伤区及邻近部位的病理变化。

注意事项

1.  由于术后大鼠体温较低，应将其放在取暖器旁边以保持体温，但也要把握好距离、防止温度过高，可以将自己的手放在大鼠的位置感觉温度是否合适。

2.  给大鼠进行排尿护理时，以手指触摸找到充盈的膀胱，然后按住膀胱底，自上而下挤压，使尿排出。挤压时耐心轻柔，切忌粗暴用力。如挤出困难，可用温水适当刺激膀胱区及外生殖器。防止对尿道区及外生殖器进行不适当的机械刺激，以免尿道水肿及外生殖器水肿翻出，定期清洁。

3.  进行BBB评分前，要将大鼠尿液排净，以免影响实验，评分时需认真、仔细观察大鼠的四肢的行走情况并记录。BBB评分可归结为：0～7分，主要看关节动否，有几个关节动；8～14分，看脚掌能否着地，着地后能否运动，运动是否协调；15～18分，看脚尖能否抓地，脚尖与前进方向是否一致，前后肢运动是否协调；19～21分，看运动时躯干稳不稳定，尾巴翘不翘。

4.  术后护理：术后将动物分笼饲养，自然光照、通风；每天更换清洁、干燥的垫料始终保持干燥；严密观察动物精神状态、饮食、排尿排便、有无肢体水肿和压伤、有无泌尿系统血性分泌物等情况，给予人工排尿每日3次；腹腔注射青霉素10万U/次，每日2次；防止自残；防止肠梗阻。

5.  模型严重程度可以根据实验要求调整撞击次数、撞击高度，建议进行预实验。