关键词： 免疫组化（Ihc） 病理技术服务 一、免疫组化的意义 免疫组化技术是用标记物标记的抗体与组织或细胞的抗原反应，结合形态学检查，对抗原作定性、定量、定位检测的技术。现广泛应用的有酶免疫组化、免疫金银组化、免疫电镜技术等。 二、免疫组化的原理 免疫组化是组织化学的一种，它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶、金属离子、同位素等，显示一定的颜色，并借助显微镜观察其颜色的变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。 三、免疫组化的步骤 1、脱蜡、水化 60 ℃×20 min→Xylene 2 ×10 minutes；60℃×20分钟→二甲苯2 × 10分钟 100% absolute ethanol：2 ×5 minutes；100%的绝对乙醇:2×5分钟; 95% ethanol 2 minutes；95%的乙醇2分钟 80% ethanol 2 minutes； 70% ethanol 2 minutes； distilled water:5 min；蒸馏水:5分钟 PBS洗3次×3 min。 2、细胞通透、封闭内源性过氧化物酶 用封闭通透液浸润切片30 min（RT避光）。配法是用预热40 ml PBS加120ul TritonX-100（曲拉通X-100又称清洁 剂）加热几分钟后，临用前加400 ul 30％H2O2。 PBS溶液洗3次×3 min。 3、抗原修复暴露抗原决定族 切片放入0.01 M柠檬酸钠缓冲溶液（pH6.0）后，在微波炉里高火4 min至沸腾后，再加热约6 min×4次，每次间隔补足液体，防止干片 4、封闭非特异性蛋白 PBS溶液洗3次×3 min； 将切片取出,周围水分用滤纸吸干,用组化笔在组织周围画上圈,在圆圈内组织滴入5%羊血清（与二抗来源一致）后放入湿盒中,室温30（10～30）min； 5、一抗孵育 甩去切片上的羊血清,用滤纸擦干组织周围残留血清，直接加入已稀释的一抗（1：250、500、1000）后，放入湿盒中室温1小时，然后4度过夜，从冰箱中取出需37 ℃复温45 min。 6、二抗孵育 将一抗倒掉并用PBS洗5 min×5次； 用滤纸将圆圈周围的水吸去，加入已稀释的二抗后放入37 ℃恒温烤箱中30 min（回收）。 用PBS洗5次×5 min； 7、SP反应 加入SP后放入37度烤箱中30 min。 用PBS洗5次×5 min； 8、显色 加入DAB（快速滴入，观察染色情况，倒掉染液），显色时间控制在约5 min（3～10 min），由镜下观察颜色控制时间。0.05％DAB（避光）（1:20储备液）：5 ul 20×DAB＋0.1 ul 30% H2O2＋95 ul PBS。1%DAB储备液的配制:50mg DAB+5ml 0.05 mol/L PBS充分溶解，-20 ℃保存。 9、复染、脱水、透明、封片 用PBS 3次×3min后，用双蒸水洗5 min； 加一大滴苏木素染液，胞核蛋白染几秒，胞浆或胞膜蛋白染20 s后自来水冲洗，双蒸水洗5 min，再用PBS返蓝5 min。 脱水：50% ethanol 1-2 min， 70% ethanol 1-2 min 95% ethanol 1-2 min； 95% ethanol 1-2 min； 100% absolute ethanol: (1-2) min； 100% absolute ethanol: (1-2) min。 透明：Xylene 1×(1-2) min→Xylene 2×(1-2) min 封片：中性树胶 四、免疫组化的特点 1、特异性强 2、敏感性高 3、定位准确、形态与功能相结合 代做免疫组化（Ihc）病理技术服务 我们公司代做免疫组化（Ihc）病理技术服务的收费标准是由客户提供一抗：300元/片，我们公司提供一抗：询价。 上海优选生物科技有限公司 联系电话：021－51352699，24小时服务热线：13818340512 传真：021－51352600 网址：www.sinobestbio.com 联系人：崔先生，QQ: 404358493 公司邮箱：info@sinobestbio.com 优选生科主要致力于免疫学、分子生物学、病理、病理分子生物、代谢组学、生物化学技术在科研中的应用与推广，专业从事相关产品的引进、服务和研发。通过高度细分、全方位的服务平台，向广大客户提供医学科研样本检测、合作研究、开发及生产。我们拥有专业的实验室和先进的实验设备及经验丰富的科研技术人员，仪器设备有：实时荧光定量PCR仪器、CO2培养箱、超低温冰箱、荧光倒置显微镜、高配置病理图像分析系统、高速冷冻离心机、PCR仪、凝胶成像系统、垂直电泳仪、生化分析仪、紫外分光光度计、酶标仪、流式细胞仪,原位杂交仪,超净工作台等。已发表的SCI文章和协助发表的SCI文章以及发表在国家核心期刊上的文章共百余篇，文章涉及临床医学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学诸多领域，实验方法涉及普通PCR、荧光定量PCR（real-time PCR）、印迹、流式、ELISA、IHC、细胞培养、MTT、放免、 病毒构建、克隆、WB、生化、分子、实验动物饲养及造模等。