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固相萃取简介
Alltech公司Maxi-Clean和Extract-Clean固相萃取小柱为样品分析前的准备提供快速和有效的纯化和浓缩,为使这些产品获得最佳的分析结果需要注意以下四个方面:
样品的物理和化学特征:影响因素如被分析物相对于介质的极性,带电荷的官能团,溶解性,分子量等等,决定了被分析物与填充床的结合强度。
选择适当的保留方法:可能的方法有两种:第一,被分析物不保留于填充床,而干扰物保留,如此纯化了样品。第二,被分析物保留于填充床,而干扰物不保留,或者在样品洗脱前先从填充床上洗脱。当样品需要浓缩时,常用的方法为此第二种方法。
选择适当的填料和填充床大小:不同的填料类型提供不同的选择性。填料类型应最大地利用被分析物和样品中的干扰物的结构差异。选择有适当选择性的填料能获得最高回收率和最高纯度的样品提取物。当填充床的大小未经优化时,通常有回收率低的问题。填充床太大时会导致洗脱不完全,而填充床太小时会导致保留不完全,两种情况结果都是回收率比预期的低。
选择合适的调节,冲洗和洗脱溶剂:必须注意各类溶剂相对于填料的洗脱强度(见下表)。上样时的样品调节溶剂应是没有洗脱作用的“弱溶剂”,必须使用缓冲液来控制潜在的带电荷化合物的离子化程度。冲洗溶剂应将弱保留的干扰物洗脱,但是洗脱强度不应太强而导致被分析物洗脱。洗脱溶剂的强度应足够使被分析物在较小的体积下(1-2ml)完全洗脱。
固相萃取的原理是基于液相色谱的原理,但它们的应用方式不同。在液相色谱中选择的流动相应使样品通过色谱柱时样品中各组份与填料不断相互作用,相互作用力不同(基于不同的化合物结构)使得样品中各种组份于不同的时间从色谱柱上洗脱,从而分离和收集各组份。在固相萃取中,初始条件的选择是让样品中的各组份完全保留在小柱上,而不是让其与填料不断相互作用,然后改变溶剂使其从填料上完全洗脱(最小相互作用)。因此而被称为“数字式”或“开关式”色谱。
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