产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入10mL蒸馏水充分溶解。
产品说明：
AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素b还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。
AAO可直接氧化AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。
自备仪器和用品：
低温离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
    称取约0.1g样品，加提取液1.0 mL，冰上充分研磨，11000g 4℃离心20min，取上清液待测。
二、AAO测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到265 nm。
2. 试剂一在25℃水浴锅中预热30 min。
3.按下表依次在微量石英比色皿/96孔板中加入试剂
 
蒸馏水
上清液
试剂一
试剂二
空白管
100
 
850
50
测定管
 
100
    迅速混匀后在265nm测定10 s和130 s光吸收的吸光值,分别为A1、A2，用A1减A2，得到△A空白管、△A测定管。
三、AAO活性计算：
使用1mL石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按蛋白浓度计算
AAO活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol AsA 为1U。
AAO(U/mg prot) = (△A测定管-△A空白管)÷（ε×d）×V反总×106÷(Cpr×V样)÷T
=0.0923×(△A测定管-△A空白管) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
AAO活性单位定义：25℃中每克样品每分钟氧化1μmol AsA 为1U。
AAO(U/g 鲜重) = (△A测定管-△A空白管)÷（ε×d）×V反总×106÷(V样÷V样总×W)÷T
=0.0923×(△A测定管-△A空白管) ÷W
    ε：AsA在265nm处摩尔吸光系数为5.42×104 L/mol/cm；d：比色皿光径（cm），1 cm；V反总：反应体系总体积（L），1000μL=1×10-3 L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），100μL=0.1 mL；T：催化反应时间（min），2min。