ECL超敏发光液使用说明

保存条件：2－8度保存有效期12个月

产品简介

ECL化学发光液在HRP的催化下发生化学反应而发光，可用于检测固定在膜上的蛋白质等生物大分子。使用照相技术（X-光胶片曝光）或者其他成像方法（如荧光或化学发光成像仪）进行检测。

我们的ECL超敏发光液是在普通的化学发光液基础之让改进而来，相对于普通发光液来说，灵敏度更高，检测下限更低，可达到pg级别的抗原，并且一抗和二抗的稀释度更高。

本产品在5分钟后光强达到最大，在30分钟时光强还能维持80%（以5分钟时光强为基础）。最终发光时长可达一小时。

操作步骤

1.在二抗孵育完毕后，将发光液从冰箱取出到室温平衡。将印迹膜充分洗涤。

2.根据需要量，将ECL超敏发光液A和ECL超敏发光液B按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液（例如：一张8cm×6cm的膜使用2ml工作液，为节省试剂，初次实验可用洗涤缓冲液测试，以最少的液体盖住整个膜的表面）。

3.弃去洗涤缓冲液，转移到暗室或者避光盒里操作，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育5分钟。

4.去掉多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。

5.在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到荧光、化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。

6.因本产品发光发光超度高，发光时间长，所以为得到理想的结果，可多次曝光（不同时长）以得到理想的结果。

注意事项

1.为获得最佳实验结果，请务必优化实验条件，包括检测样品的用量、一抗、二抗稀释度、杂交膜及封闭试剂的选择，并且发光液请现用现配。

2.建议在封闭缓冲液及所有抗体稀释液中加入高质量的吐温-20（终浓度为0.05%），以减少非特异性结合。

3.由于叠氮钠是HRP抑制剂，在缓冲液中应避免使用叠氮钠作为防腐剂。

4.免疫印迹实验进行全过程中，请确保印迹膜始终处于湿润状态，避免干燥。

5.在与膜发生接触过程中请佩戴手套或者使用洁净镊子，避免蛋白污染。

6.实验过程中，请使用洁净器材。保证非金属设备没有明显划痕，金属设备表面无锈。锈可能导致膜上带有污点或者高背景。