SplintR DNA连接酶

中文名称：SplintR DNA连接酶
英文名称：SplintR DNA Ligase
产品规格：1250U|5KU
SplintR DNA连接酶能够高效催化相邻的DNA核苷酸的连接，这个连接过程需要一条互补的RNA在两条DNA单链间起“夹板”或“桥梁”的固定作用。PBCV DNA连接酶的这种活性远远优于传统的T4 DNA连接酶，有助于miRNAs和mRNAs，包括SNPs在内的研究方法的创新。另外，在二代测序和分子诊断等众多领域中，PBCV DNA连接酶是富集目的基因的理想选择。它具有稳定的生物活性，对 RNA 介导固定的DNA 底物亲和性强（米氏常数Km = 1nM），能够在复杂的混合物中检测到亚纳摩尔级的特定RNA。因此，在RNA检测技术中，PBCV DNA连接酶不失为最佳选择用酶。

产品组成：

储存条件：-20℃可保存3年。

产品应用：
· 单链DNA的连接
· 基于探针法的miRNA的检测
· SNP或剪接体的检测
· RASL分析

活性定义：1单位指20μl反应体系中，1×SplintR连接酶反应缓冲液，16℃ 条件下，15 分钟内能使 2 pmol的DNA:RNA 杂交底物连接反应完成50%所需的酶量。

反应温度及失活：该酶的最佳反应温度为25度，可在16-37度之间优化，37度可明显提高反应的特异性；该酶在65℃ 加热20分钟即可失活。

使用注意事项：
1．1×SplintR Ligation Buffer：50mM Tris-HCl pH 7.5，5mM MgCl2，10mM DTT。
2．该酶对ATP的要求比较宽泛，10-100uM ATP范围内都可发挥活性，5mM Mg2+可显著增加连接产物的量，最佳ph为7.5～8.0。
3．该酶对一价阳离子非常敏感，如Nacl或KCl的浓度应低于50mM，100mM的Nacl会完全抑制连接反应。
4．该酶的反应温度为16～37℃，随着温度的上升酶活性会提高，但此时腺苷化产物也随之增加，最佳温度为25 ℃。
5．连接效率随着夹板RNA长度的减少而降低，当长度小于等于10nt时，连接效率为零。
6．供体的5’端第一个碱基为“A/T”时连接效率最高。
7．受体的3’端第一个碱基为“T”时连接效率最高，3’端第一个碱基为“G”时连接效率最差。

使用方法：
1．底物和夹板退火
建议反应体系中底物浓度在50 nM～2μM 之间，体系中酶的浓度低于1μM（该SplintR酶为 10μM）。在连接反应中，酶的浓度可设为底物浓度的2～3 倍。将等摩尔浓度的底物混合均匀，75℃ 2分钟后缓慢降温至室温。
2．连接反应
  退火后产物（1μM）————————————2μl
  10× SplintR Ligation Buffer 2——————2μl
  SplintR DNA Ligase————————————1μl
  灭菌水——————————————————up to 20μl
  25℃反应15～60分钟。
3．65℃加热20分钟，使酶失活。

别名：PBCV DNA连接酶；Chorella病毒DNA连接酶 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！