产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。用前用15mL无水乙醇充分溶解.  
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。用前将20mL试剂三倒入试剂二瓶中充分溶解。
试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在450nm光吸收增加速率，计算CarE活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。
 
操作步骤：
一、粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）；然后15000rpm，4℃，离心30min，取上清置于冰上待检。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000rpm，4℃，离心30min，取上清置于冰上待检。
血清：直接测量。
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。
2、 试剂二和试剂一置于37℃水浴中预热30 min以上。
3、 在微量玻璃比色皿或96孔板中进行如下操作：
加入试剂（μL）
空白管
测定管
蒸馏水
5
 
上清液/血清
 
5
试剂二
200
200
试剂一
120
120
迅速混匀后，测定第10s的吸光值记为A1空和A1测，反应3min，吹打混匀后立即测定190s的吸光值，记为A2空，A2测。注意：空白管只需做1~2次。计算△A空白管=A2空-A1空，△A测定管=A2测-A1测。
CarE活性计算：
按微量玻璃比色皿或96孔板计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃下，每mL反应体系每mg组织蛋白每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。
CarE酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管)×V反总÷(Cpr×V样)÷T= 21.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：37℃下，每mL反应体系每g组织鲜重每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。
CarE酶活(U/g鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷（W ÷V样总×V样）÷T=21.67×(△A测定管-△A空白管)÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：37℃下，每mL反应体系每1万个细菌或细胞每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。
CarE酶活(U/104cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷（200÷V细胞样总×V样）÷T=0.13×(△A测定管-△A空白管)
（4）按血清计算：
单位的定义：37℃下，每mL反应体系每mL血清每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。
CarE酶活(U/mL)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总 ÷V血清÷T=21.67×(△A测定管-△A空白管)。
V样总：上清液总体积，1mL；V样：加入样本体积，0.005 ml；T：反应时间，3min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；200：细菌或细胞总数，200万；V细胞样总：细胞中加入的试剂一体积，0.4mL；V血清：加入血清体积，0.005mL；V反总：反应体系总体积，0.325mL。
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