Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
产品名称： Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
英文名称： Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品编号： 40309ES20
产品价格： 0
产品产地： Yeasen
品牌商标： Yeasen
更新时间： 2023-08-17T13:40:59
使用范围： null
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Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
Annexin V-APC/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品信息
产品描述
Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用荧光素APC标记的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
其检测原理为：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-V（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
另外，本试剂盒中提供的7-AAD可用来区分存活的早期细胞和坏死或晚期凋亡细胞。7-AAD是一种核酸染料，同PI有着相似的荧光特性，但其发射光谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，可与Annexin V联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA结合。因此将Annexin V-APC与7-AAD联合使用时，7-AAD则被排除在活细胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V-APC和7-AAD结合染色呈现双阳性（Annexin V+/7-AAD+）。
产品组分
*来源于大肠杆菌（E.coli），分子量为35.8 KDa，纯度＞98%（SDS-PAGE&HPLC）
运输和保存方法
冰袋运输。本试剂盒中所有组分均在4℃保存，勿冰冻。Annexin V-APC、7-AAD需避光保存。一年有效。
注意事项
1） 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2） 7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等；
3） 推荐使用悬浮培养细胞。若是贴壁细胞，建议使用不含EDTA的胰酶消化，如果消化不当，可能引起假阳性；若用细胞刮子则会造成细胞黏连成团而影响检测。可将胰酶消化后的细胞保存于含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。
4） 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×105，不推荐用于组织样本检测。
5） 请勿固定样品，细胞固定后可能导致荧光的猝灭；
6） 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡细胞处理的细胞作为阴性对照，并进行荧光补偿的调节。
7） 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并低速离心（200×g）洗去血小板，然后用Annexin V结合缓冲液清洗细胞，以避免残留的EDTA会螯合Ca2+。
8） Annexin V-APC和7-AAD是光敏物质，在操作时请注意避光。
9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
1.1 样品染色
贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
2. 用4℃预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300g，4℃离心5 min。收集1-5×105细胞。
3. 加入500μl 的Binding buffer 悬浮细胞；
4. 加入5μl Annexin V-APC混匀后，加入5μl 7-AAD染液，混匀；
5. 室温、避光反应5-15min；样品在1小时内检测。
1.2 观察检测
A、流式细胞仪分析
1) 用流式细胞仪检测，Ex/Em=633/660nm 检测Annexin V-APC红色荧光建议使用FL4通道；Ex/Em=546/647nm检测7-AAD红色荧光建议使用FL3通道。
2) 荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
B、荧光显微镜观察
1）滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2）对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
a 将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
b 用PBS洗涤细胞两次；
c 在500μl的Bingding buffer 中加入5μl Annexin V-APC，5μl 7-AAD染液混匀；
d 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
e 室温避光孵育5min。
3）将盖玻片倒置于载玻片上，在荧光显微镜下用双色滤光片观察。于激发波长633nm，最大发射波长660nm观察Annexin V-APC 红色荧光信号；激发波长546nm，发射波长647nm，观察7-AAD红色荧光信号。
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