金属螯合高流速琼脂糖凝胶
产品名称： 金属螯合高流速琼脂糖凝胶
英文名称： Ni Chelating Seplite FF
产品编号： lx
产品价格： 0
产品产地： 陕西西安
品牌商标： seplite
更新时间： null
使用范围： null
西安蓝晓科技新材料股份有限公司
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金属螯合高流速琼脂糖凝胶（IDA）
金属螯合高流速琼脂糖凝胶（IDA）是将亚氨基二乙酸基键合在高流速6B琼脂糖凝胶上，再螯合金属离子Zn2+或Ni2+形成的一种亲和层析介质，利用样品组分中的组氨酸等氨基酸残基与金属离子的亲和吸附进行分离纯化。
该产品若不螯合金属离子为白色球状凝胶，若螯合不同金属离子则显现不同颜色，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。
产品指标：
| 项 目 | 指 标 | |
| 配 基 | -N（CH2COOH）2 | |
| 基 质 | 6% 高交联琼脂糖 | |
| 形状 | 球形 | |
| 粒径（μm） | 50~160 | |
| 离子结合量（Zn2+）（μmol/ml） | 24~30 | |
| 最高流速（25℃）（cm/h） | ≧370 | |
| 耐 压（MPa） | 0.3 | |
| 耐 热 | pH7.0水中120℃20min | |
| pH适用范围 | 2~14 （短时间）；3~13（长时间） | |
| 化学稳定性 | 以下溶液中稳定： 1mol/L NaOH;20%EtOH; 0.01mol/L盐酸； | |
⑴ 装柱
- 让所有材料和试剂达到室温，配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
- 根据柱子大小取所需量的凝胶（约为柱床体积的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3:1的比例）配成匀浆，凝胶匀浆须做脱气处理。
- 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
- 用玻璃棒引导凝胶匀浆沿着柱子内壁一次性倒入柱内，注意不要产生气泡；打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连接好柱子顶端柱头。
- 打开蠕动泵，让缓冲液按照正常使用流速1.3倍的流速过柱，使柱床稳定；用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
该介质可以根据需要，螯合不同的金属离子，如Zn2+、Ni2+或Cu2+等。Cu2+与蛋白质结合较强，某些蛋白质只与Cu2+结合；Zn2+与蛋白质结合较弱，可进行选择性洗脱，得到目标产品；Ni2+可选择性地与带组氨酸的蛋白质结合。（对于该产品，客户可选择自行螯合，也可选择购买已螯合的介质）
在pH值偏酸性的条件下，让过量的含金属离子的可溶性盐溶液缓慢地流过柱子，金属离子即被螯合在介质上。
⑶ 平衡
使平衡缓冲液以一定的流速流过柱子，至流出液电导和PH不变。
⑷ 上样
① 样品用平衡液配制，常用NaOAC或PBS缓冲液，PH5.5~8.5；浑浊的样品要离心过滤后上样。
② 一般情况下使目标产品结合在介质上，用平衡液洗去杂质，再选择另一种洗脱液洗下目标产品。
③ 介质对样品组分吸附的程度取决于样品的性质、金属离子种类和流动相的性质。
⑸ 洗脱
洗脱一般有两种方式：一是减小pH值，大多数蛋白质在pH 6~4的范围内可被洗下来；二是用一种竞争试剂，将蛋白质从柱子上置换下来，如用咪唑、组氨酸或氯化铵。用竞争试剂咪唑或减小pH值的方式洗下蛋白质，金属离子仍然在介质上；若用竞争试剂组氨酸或氯化铵洗脱蛋白质，则会将金属离子和蛋白质的一起洗下来。
洗脱常用增加竞争试剂或减小pH的分段洗脱或梯度洗脱，如0.05mol/L的PBS中含0.01~0.5mol/L的咪唑，做分段洗脱。
⑹ 再生
若金属离子未流失，再生后接着用结合蛋白质的平衡液洗到平衡，介质可再次使用。若金属离子已流失或为了保险起见，须重新进行介质的金属离子螯合操作。若要改变螯合的金属离子，可用EDTA溶液先除去现在螯合的金属离子，再重新进行介质的金属离子螯合操作。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。